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非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法）說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法）
英文名稱：API 20 NE
【包裝規(guī)格】
25 測試/盒
【預(yù)期用途】
該產(chǎn)品用于非苛養(yǎng)、非腸道革蘭陰性桿菌的鑒定。
該產(chǎn)品用于鑒定非苛養(yǎng)、非腸道革蘭陰性桿菌（如假單胞菌屬、不動桿菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬、弧菌屬
和氣單胞菌屬等）的標(biāo)準(zhǔn)鑒定系統(tǒng)，包括 8 個常規(guī)試驗、12 個同化試驗和 1 個數(shù)據(jù)庫。
【檢驗原理】
API 20 NE 試劑條由裝有脫水底物的 20 個微型管構(gòu)成。常規(guī)試驗接種重溶培養(yǎng)基的鹽水細(xì)菌懸液。在
培養(yǎng)過程中，代謝產(chǎn)生顏色變化，此變化可為自發(fā)或通過加入試劑顯示。同化試驗接種低培養(yǎng)基，如果它
們能夠使用相應(yīng)的底物，則細(xì)菌生長。依照讀數(shù)表讀取反應(yīng)，通過參考分析曲線指標(biāo)或使用鑒別軟件得到鑒
別。
【儲存條件及有效期】
2~8℃儲存，有效期為 12 個月。
【適用儀器】
-
麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管 (Ref. 70 900) No. 0.5
-
API 20 NE 分析鑒定系統(tǒng) (Ref.20 090) 或 apiweb™鑒定軟件 (Ref.40 011) (咨詢生物梅里埃)
【樣本要求】
API 20 NE 不直接用于臨床或其他標(biāo)本。
按照標(biāo)準(zhǔn)微生物學(xué)技術(shù)，必須首先在適合的培養(yǎng)基（如胰蛋白酶解酪蛋白）上分離要鑒定的微生物。
【檢驗方法】
氧化酶試驗
必須按照生產(chǎn)商的使用說明，進(jìn)行氧化酶試驗。應(yīng)當(dāng)在結(jié)果單上記錄結(jié)果，因為它是最后圖譜的一個有
機(jī)部分（第 21 個鑒定試驗）。
菌落
API 20 NE 只應(yīng)用于不屬于腸桿菌科的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌。
注 1：有些非腸道的革蘭陰性桿菌亦為氧化酶陰性（嗜麥芽黃單胞菌、不動桿菌…）。這些微生物也可以
用 API 20 NE 鑒定，但必須根據(jù)其它細(xì)菌學(xué)或臨床標(biāo)準(zhǔn)加以選擇。
注 2：對營養(yǎng)要求多或需要適當(dāng)處理注意事項的苛養(yǎng)微生物（如布魯氏菌和弗朗西絲氏菌），未包含在 API
20 NE 的數(shù)據(jù)庫內(nèi)。必須采用其他方法排除或證實它們的存在。
試條的準(zhǔn)備
準(zhǔn)備一個培養(yǎng)盒、盤和蓋子，向盤的底部倒入約 5mL 蒸餾水或去離子水【或任何不含添加劑或可能釋放
氣體（如氯氣、二氧化碳等）的化學(xué)物的水】，創(chuàng)造一種濕氣。在盤的邊緣部分記錄標(biāo)本編號。（不要在蓋上
記錄編號，因為在操作期間它可能錯位。）從各個包裝中取出試劑條。將試劑條放入培養(yǎng)盒中。
接種物的準(zhǔn)備
? 按照本產(chǎn)品說明書“警告和注意事項"段落所示，打開一安瓿 API NaCI 0.85 %培養(yǎng)基（2 mL），或使
用含 2 mL 不含添加劑的 0.85 %生理鹽溶液。
? 使用吸管或滴管，通過抽吸或通過連續(xù)接觸，從瓊脂糖培養(yǎng)基上挑取 1 - 4 個形態(tài)相同的克隆。建議
使用早期培養(yǎng)物（18 - 24 小時）。
? 配制混懸液至濁度等于 0.5 McFarland。此混懸液在配制后必須立即使用。
注：調(diào)整接種物密度至 0.5 McFarland 非常重要；否則 API 20 NE 試劑條試驗可能不能正確發(fā)揮功能。
特別是，較弱的接種物可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。在操作試劑條的過程中，不要接觸反應(yīng)杯，接種后不要將試劑
條長時間暴露空氣。
試條的接種
? 用同一根吸管將鹽水混懸液加到試驗管（不是反應(yīng)杯），接種試驗 NO3到 PNPG。將試劑條稍前傾，將吸
管或滴管的頂部靠在杯的側(cè)面，以避免管的底部形成氣泡。非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法） 版本號 07615K -CN –2009/11
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?
按照“警告和注意事項"中所示，打開 1 個 API AUX 培養(yǎng)基安瓿，向安瓿加入約 200 L 剩余的鹽混懸液。
用吸管混勻，避免形成氣泡。
?
用混懸液注滿由 GLU 至 PAC 試驗管和杯。當(dāng)心液面必是平的或稍凸，不能呈凹或新月形。杯子裝得不
滿或過滿可能給出不正確的結(jié)果。
?
向 3 個下劃線試驗（GLU、ADH 和 URE）的杯子加礦物油，直至形成凸出的新月形。
?
蓋上培養(yǎng)盒，在 29°C ± 2°C 培養(yǎng) 24 小時（± 2 小時）。
【陽性判斷值】
對于不同生化反應(yīng)預(yù)期結(jié)果的范圍，查閱本說明書末尾的鑒別表。
【檢驗結(jié)果的解釋】
讀取試劑條
?
孵育期后，通過參閱判讀表，判讀試劑條。
?
在結(jié)果單上記錄所有自發(fā)反應(yīng)（GLU、ADH、URE、ESC、 GEL 和 PNPG）。
?
為保護(hù)同化反應(yīng)免受空氣播散的污染，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行兩個試驗 NO3 和 TRP 的判讀。要做這一點，在 NO3 和
TRP 試驗判讀期間，用培養(yǎng)盒蓋子遮蓋同化反應(yīng)。
?
NO3 試驗：
-
各加一滴 NIT1 和 NIT2 試劑至 NO3 杯。
-
5 分鐘后，紅色表示陽性反應(yīng)，記錄在報告單上。
-
由于氮氣的產(chǎn)生（表現(xiàn)為存在小氣泡）有可能引起陰性反應(yīng)：加 2~3 mg Zn 試劑到 NO3杯中。
-
5 分鐘后，保持無色的杯子表明陽性反應(yīng)，記錄在報告單上。如果杯子變?yōu)榉奂t色，反應(yīng)為陰性，因為管
中存在硝酸鹽，被鋅還原為亞硝酸鹽。
用于細(xì)菌鑒定的反應(yīng)是硝酸鹽還原。當(dāng)上述二個反應(yīng)（產(chǎn)生 NO2 或 N2）中的任何一個為陽性時，硝酸鹽
還原反應(yīng)為陽性。
但是，N2的產(chǎn)生則可單獨用作補(bǔ)充試驗（參閱分析圖譜索引）。
?
檢測：
加 1 滴 JAMES 試劑。立即發(fā)生反應(yīng)：全杯出現(xiàn)粉紅色表明陽性結(jié)果，記錄在結(jié)果單上。
?
同化試驗：觀察細(xì)菌生長。不透明杯子表明陽性反應(yīng)。
偶爾，1 個杯子顯示為弱生長。在這種情況，通過與試劑條上的其他試驗強(qiáng)度比較，結(jié)果應(yīng)當(dāng)記錄為 或
±。
注意:
一旦進(jìn)行了上述判讀，如“解釋"段落中所示，鑒定是可能的。在下列情況，必須重新孵育：
-
無區(qū)別
-
無法接受或可疑的圖譜；
-
如果對獲得的圖譜標(biāo)注了以下備注：
在 48 小時孵育前鑒定是無效的
使用習(xí)慣或滴管，通過抽吸吸走 NIT 1、NIT 2 和 JAMES 試劑，立即用礦物油掩蔽試驗 NO3 和 TRP，以便形
成凸的新月形。在 29°C ± 2°C 重新孵育 24 小時，除了只應(yīng)在 24 小時判讀的前 3 個試驗（NO3、TRP 和 GLU），
其余試驗再讀一次結(jié)果。
說明：
采用數(shù)字譜獲得鑒定。
?
測定使用率：
在結(jié)果表上，將結(jié)果分成 3 組，每組標(biāo)記為編號 1、2 或 4。在每組內(nèi)加陽性反應(yīng)相應(yīng)的數(shù)字，得到一個
7 位數(shù)；氧化酶反應(yīng)構(gòu)成第 21 個反應(yīng)，如果為陽性則數(shù)值為 4。
?
鑒定：
這采用數(shù)據(jù)庫（V7.0）進(jìn)行
*
棒狀桿菌鑒定用編碼冊
-
查找圖譜中的數(shù)字譜。
梅里埃API20NE非發(fā)酵G-桿菌鑒定試劑盒
梅里埃API20NE非發(fā)酵G-桿菌鑒定試劑盒
